:
1- يمنع منعا باتا الأكل والشرب في المعمل.
2- نظف أدواتك الزجاجية قبل بدء المعمل وعند نهايته.
3- اقرأجيدا كل اختبار قبل البدء فيه.
4-دون نتائجك أولا باول في كراسة المعمل مع مراعاة أن النتائج السلبية هامة بنفس أهمية النتائج الايجابية .
5- عند اضافة كاشف معين يجب الـتأكد من اسم الكاشف بقراءة الورقة الملصقة على زجاجية الكاشف.
6-لا تقم باجراء أية تجربة لم تطلب منك.
7-يجب الأنتباه عند خلط السوائل وخاصة الأحماض مع الماء.
8- يجب استخدام الماصة الخاصة بنفس زجاجة الكاشف.
9-لا تضع أغطية زجاجات الكواشف على سطح البنش حتى لا تتلوث بمواد أخرى.
10- في حالة سقوط حامض أو قلوى على يديك يجب الأسراع بغسلها عدة مرات بالماء وابلاغ الأساتذة بالمعمل.
11-التجارب التي يصاحبها تصاعد غازات أو ابخرة سامة أو ذات رائحة كريهة يجب القيام بها في خزانة الغازات.
12-يجب غسل الأيدي بالماء والصابون جيدا بعد الأنتهاء من المعمل.
13-عند التسخين يراعى تحريك الأنبوبة باستمرار على اللهب مع توجيه فتحتها الى الجهة العكسية بعيدا عن الوجه.
14-عند اضافة مادة الى مادة اخرى بالأنبوبة تكون الأضافة بالتدريج.
مقدمة عامة عن الإنزيمات
الأنزيمات عبارة عن عوامل مساعدة بيولوجية تكونها خلايا الكائن الحي وتتكون أساسا من مواد بروتينية ذات وزن جزيئي كبير ووظيفتها الأساسية الإسراع بالتفاعلات الحيوية وتنظيمها حتى تستمر الحياة .
كيميائيا؛ معظم الإنزيمات عبارة عن بروتينات . حيث ان كل أنزيم متخصص له تركيبه فيزيائية خاصة به تمكنه من أداء وظيفته، حيث أن شكل كل أنزيم متخصص يتناسب مع شكل الجزيء المتفاعل معه ( القفل والمفتاح ) . ولان توافقية الإنزيمات موجودة فان الجزيئات المتفاعلة تحضر معا في مكان الربط المناسب . لذلك فان الإنزيمات تقلل طاقة التنشيط اللازمة للتفاعل الكيميائي . ( شكل 3أ ) ان الجزيء الذي يتفاعل يطلق عليه مادة التفاعل ( substrate ) ويلاحظ ان مادة التفاعل ( ( S ترتبط بالمركز النشط للأنزيم (E)
مكونا معقد من الأنزيم ومادة التفاعل يرمز له ب ((enzyme – substrate complex (ES) .
وعندما يحدث التفاعل الكيميائي ويتكون الناتج فان الأنزيم يتحرر ويعود إلى تركيبته الأصلية لكي يتم استخدامه مرة أخرى .
هناك بعض العوامل التي تؤثر على النشاط الأنزيمي مثل تركيز مادة التفاعل , تركيز الأنزيم , درجة الحرارة ودرجة حموضة لذلك فان الأنزيم يحتاج إلى درجه حرارة ودرجه حموضة مناسبة لكي يقوم بعمله ( شكل 3ب و 3ج ) .
شكل 3أ : تقليل طاقة التنشيط للتفاعل بوجود الأنزيم .
شكل 3 ب . تأثير درجة الحرارة على نشاط الإنزيم كلما زادت درجة الحرارة زادت فاعلية الأنزيم حتى تصل لدرجة معينة . بعدها تبدأ بالإنخفاض ويبدأ الأنزيم بالتحلل فيصل النشاط الإنزيمي إلى الصفر .
شكل 3ج: تأثير درجة الحموضة (PH) على فعالية الأنزيم . كل أنزيم له درجة حموضة
مناسبة لعمله .
تأثير إنزيم الأميلاز على النشا
(تحلل النشا بواسطة الأميلاز)
يتحلل النشا بتأثير مجموعة إنزيمات الأميلاز الموجودة في اللعاب وعصارة البنكرياس بصورة رئيسية
وبشكل عام يعطي النشا مخلوطا من ديكسترينات ومالتوز وتختلف هذه المشتقات في سلوكها تجاه محلول اليود. فالنشا يعطي لونا أزرق لكن الديكسترينات تعطي ألوانا مختلفة بين البنفسجي والأصفر والأحمر ، أما المالتوز فإنه يتفكك إلى جزيئين من الجلوكوز بتأثير المالتز ويمكن دراسة الخواص الأختزالية للسكاكر باستخدام تفاعل فهلنج أو بندكت.
انزيم الأميلاز موجود في اللعاب ومحلول التخمروالبول .
الأدوات المستخدمة :
- أنابيب زجاجية
- حمام مائي
- ماصات زجاجية.
- ترمومتر لضبط درجة حرارة 37م الحمام المائي.
- دورق زجاجي.
- دورق عياري.
المواد المستخدمة :
1- محلول اللعاب : يخفف اللعاب بمقدار عشرة اضعاف حجمه من الماء المقطر.
2- محلول النشا 1%.
3- محلول اليود في يوديد البوتاسيوم.
4- محلول فهلنج أو بندكت.
طريقة العمل :-
1- احضر 4 انابيب اختبار ثم قم بترقيمها ( 1و 2و 3و4 )
2- ضع في كل أنبوب اختبار 1مل من اللعاب المخفف.
3- ثم يضاف لكل الأنابيب 1 مل من محلول النشا المخفف.
4- يوضع كلا من أنابيب الأختبار في حمام مائي درجة حرارته 37 م لمدة 30 دقيقة.
5- بعد اول عشر دقائق نخرج الانبوب الأول والثاني بعد 15 دقيقة ونضيف في كل انبوب 2مل من هيدروكسيد الصوديوم (1.5%) لأيقاف التفاعل .
6- يجرى على محتويات كلا من الأنبوبين تفاعل اليود وتفاعل فهلنج.
7- بعد 20 دقيقة نجري اختبار فهلنج واليود على الأنبوب الثالث بعد ايقاف التفاعل باضافة 2مل هيدروكسيد الصوديوم.
8- بعد 30 دقيقة نجري اختبار فهلنج واليود على الأنبوب الرابع بعد ايقاف التفاعل باضافة 2مل هيدروكسيد الصوديوم.
9- سجل ملاحظاتك ( درجة الشفافية للمحلول ) .
من المفترض ان يكون تفاعل اليود سلبي وتفاعل فهلنج ايجابي وذلك بالتدريج من الأنبوب الأول وحتى الأنبوب الرابع
النتائج: دون النتائج التي حصلت عليها وملاحظاتك أدناه.
1- تفاعل اليود :
وهو تفاعل خاص بالنشا ، لكنه سلبي مع السكريات الأحادية والثنائية . أما مبدأه فيعتمد على تفاعل أيونات اليود مع سلاسل جزيء النشا (الأميلوز)لتتكون معقدات ذات لون أزرق..
المواد المستعملة :
1- محلول النشا
2- محلول اليود: ويحضر بإذابة 2 جم من يوديد البوتاسيوم في كمية من الماء ثم يذاب أيضا 1 جم من اليود ويكمل الحجم الى 100 مل .
طريقة العمل :
يوضع في انبوب اختبار 3 مل من محلول النشا ويضاف اليها قطرة من محلول اليود وعندما يخلطان يلاحظ لون ازرق غامق يزول بالتسخين المعتدل ويعود بالتبريد.
2-تفاعل فهلنج:
ترتبط قدرة الكربوهيدرات على الأختزال بوجود مجموعة الألدهيد أو مجموعة الكيتون ويمكن التمييز بين السكريات الأحادية المختزلة والنشا (سكريات عديدة ) الغير مختزلة بتفاعل فهلنج.
المواد المستخدمة:
- محلول فهلنج ا ومحلول فهلنج ب
- حمام مائي
- ماصات زجاجية
- انابيب زجاجية
طريقة العمل :
- امزج كميتين متساويتين من محلول فهلنج ا وفهلنج ب ( 1 مل لكل منهما).
- اضف 1 مل من محلول المادة الكربوهيدراتية في الماء.
- سخن المحلول لدرجة الغليان لمدة دقيقة أو دقيقتين.
- اذا تكون راسب احمر من اكسيد النحاسوز كان هذا دليلا على وجود مادة كربوهيدراتية ذات قدرة على الأختزال .
- يعطي هذا الأختبار كلا من السكريات الأحادية والثنائية عدا السكروز ولا يعطي مع عديدة التسكر.
تأثير الأس الهيدروجيني (PH) على نشاط انزيم الأميلاز
تأثير تغييرات درجة PH الوسط على نشاط الأنزيم :
لكل انزيم درجة مثلى من حموضة الوسط يبلغ عندها نشاطه الأقصى وتنخفض فعالية الأنزيم كلما زادت حموضة الوسط أو قلت عن القيمة المثلى.
تؤثر حموضة الوسط على شحنة السلاسل الجانبية للأحماض الأمينية الحامضية او القاعدية وخاصة على مستوى الموقع الفعال للأنزيم فتتغير بنيته وبالتالي يتأثر نشاط الأنزيم .
درجة الحموضة المثلى لأنزيم الببسين هي من 1.5-2.5 ولأنزيم الأميلاز اللعابي 6.8-7 ولأنزيم التربسين 7.8 .....وهكذا.
تجربة (1):
الأدوات المستخدمه :
- حمام مائي
- ميزان حراري .
- انابيب اختبار زجاجية
- ماصات زجاجية
المواد المستخدمه:
1- محلول اللعاب المخفف في الماء(100:1).
2- محلول النشا 0.5%.
3- محلول حامض الستريك (0.1مول) ويخضر بإذابة 19.2جم من بلورات الحامض النقية في لتر من الماء المقطر.
4- محلول اليود
5- محلول كلوريد الصوديوم 1%.
6- محلول فوسفات الصوديم الحامضية (0.2مول) ويحضر بإذابة 36.6جم من الملح المذكور في لتر من الماء.
طريقة العمل :
-يؤخذ في خمسة أنابيب أختبار، الاحجام المذكورة في الجدول من محلول فوسفات الصوديوم الحامضية ومحلول حامض الستريك لكي نحصل على محاليل درجة الحموضة لها تقع بين 5.6 و 8
-ثم يضاف الى كل انبوب 10 قطرات من محلول اللعاب المخفف (100:1) و1 مل من محلول النشا 0.5% في كل انبوب .
- تمزج المحتويات بشكل جيد.
رقم الأنبوب حجم محلول حامض الستريك حجم محلول فوسفات الصوديوم الحامضية قيمة PHللمزيج
1 0.42 0.58 5.6
2 0.31 0.69 6.4
3 0.13 0.87 7.2
4 0.06 0.94 7.6
5 0.03 0.97 8
-توضع الأنابيب لمدة 10 دقائق في حمام مائي درجة حرارته 37م .
-تخرج وتبرد بسرعة
- يضاف الى كل منها قطرة من محلول اليود.
- يرج المحلول.
- يلاحظ ظهور اي لون بين الأصفر والأصفر الداكن للتعرف على درجة الحموضة المناسبة للفعل الأنزيمي على النشا.
النتائج: دون النتائج التي حصلت عليها وملاحظاتك أدناه.
تجربة (2):
الأدوات المستخدمه :
- حمام مائي
- ميزان حراري .
- انابيب اختبار زجاجية
- ماصات زجاجية
المواد المستخدمه:
1- محلول اللعاب .
2- محلول النشا 1%.
3- HCL (0.8%).
4- كربونات الصوديوم(0.5%).
5- محلول اليود
6- محلول كلوريد الصوديوم 1%.
7- محلول فهلنج.
طريقة العمل :
-يؤخذ في4 أنابيب أختبارتركيزات مختلفة :
في الأنبوبة الأولى 1 مل من اللعاب مع 1 مل الماء.(حموضة الوسط المتعادل)
في الأنبوبة الثانية 1 مل من اللعاب مع 1مل حمض الهيدروكلوريك (0.8%)(وسط حمضي PH=4(
في الأنبوبة الثالثة 1 مل من اللعاب مع 1مل كربونات الصوديوم (0.5%).( وسط قلوي PH=8 (
في الأنبوبة الرابعة 2 مل من الماء المقطر
الأنزيم يحتاج الكلوريد كعامل مساعد.
- اضيف 1مل نشا (1%) الى كل الأنابيب.
- ضع كل الأنابيب في حمام مائي لمدة 30 دقيقة عند 37 م.
- ثم تفاعل فهلنج او تفاعل اليود .
- دون النتائج ادناه
تأثير درجة حرارة الوسط على نشاط انزيم الأميلاز
لكل انزيم درجة حرارة مثلى يصل عندها لأقصى درجة نشاط له عند الإنسان(37م).
عند درجة حرارة صفر م يتوقف عمل الإنزيمات نتيجة توقف الإصطدامات الجزيئية بين جزيئات المادة وأيونات الماء لكنها تسترجع نشاطها عند رفع درجة الحرارة لتصل الى اقصى درجة نشاط لها عند درجة حرارة معينة ثم يلي ذلك انخفاض تدريجيا كلما ارتفعت درجة الحرارة عن درجة الحرارة المحددة له .وعند درجة حرارة مرتفعه (اكثر من 55 م) يتلف اويفسد الإنزيم نتيجة انكسار بعض الروابط التي تشكلت خلال البناء الثلاثي الأبعاد لتركيبه وبالتالي يفقد فعاليته ونشاطه.
الأدوات المستخدمة :
- أنابيب زجاجية
- حمام مائي
- ماصات زجاجية.
- ترمومتر لضبط درجة حرارة 37م الحمام المائي.
- دورق زجاجي.
- دورق عياري.
المواد المستخدمة :
1-محلول اللعاب : يخفف اللعاب بمقدار عشرة اضعاف حجمه من الماء المقطر.
2-محلول النشا 1%.
3-محلول اليود في يوديد البوتاسيوم.
4-محلول فهلنج أو بندكت.
طريقة العمل :-
1-احضر 4 انابيب اختبار ثم قم بترقيمها ( 1و2و3و4).
2-ضع في كل أنبوب اختبار 1مل من اللعاب المخفف.
3-يغلى الأنبوب الأول والثاني لمدة 3-4 دقائق ثم يضاف لكل الأنابيب1 مل من محلول النشا المخفف.
4-يوضع كلا من أنابيب الأختبار في حمام مائي درجة حرارته 37 م لمدة 20 دقيقة.
5-يجرى على محتويات الأنابيب تفاعل اليود وتفاعل فهلنج.
6-سجل ملاحظاتك ( درجة الشفافية للمحلول ) .
(نلاحظ أن تفاعل اليود إيجابي في الأنبوب الأول والثاني وسلبي في الأنبوب الثالث والرابع أما تفاعل فهلنج فيكون سلبيا في الأنبوب الأول والثاني وايجابيا في الأنبوب الثالث والرابع ).
تقدير تركيز اللاكتوز في اللبن
يعتبر اللبن من الأغذية الكاملة الذي يحتوي على العديد من البروتينات والفيتامينات والسكريات ويختلف تركيز كل نوع طبقا لنوع الحيوان والظروف المناخية التي يعيش فيها .وهناك عدة وسائل لفصل كل نوع من الأنواع السابقة والكشف عنها معمليا بل اعادت تركيزها .وفي هذه التجربة يتم فصل اللاكتوز من اللبن وايجاد نسبة تركيزه.
اللاكتوز:
وهو سكر اللبن والذي تستخرج منه كثير من السكريات ذات الأهمية الصحية مثلا اللاكتوز وهو أحد المدعمات الغذائية المهمة لنشاط بكتيريا البفيدوا والتي لها علاقة إيجابية جداً بصحة الإنسان فهي تحسن في البيئة الميكروبية للأمعاء كما أن لللاكتوز تأثير مرغوب على نشاط الكبد ويستخدم هذا السكر حالياً على نطاق واسع لتدعيم أغذية الرضع وكبديل للسكر للأفراد المصابين بمرض السكر وكبديل للسكر في الحلوى وفي العديد من الأغذية الخاصة بكبار السن كذلك يستخرج في سكر اللبن السكريات العديدة مثل الجلاكتوز العديد Oligogalactosaccride ويرجع الأثر الصحي لهذا السكر العديد إلى أنه:
1- يثبط العديد من الميكروبات الضارة وبالتالي فهو يحسن البيئة الميكروبية للأمعاء
2- يخفض من مستوى الأمونيا العالي المصاحب لحالات التليف الكبدي
3- يساعد في التقليل من مخاطر الإصابة بسرطان القولون
4- يساعد على امتصاص الكالسيوم
5- يعمل على تنظيم الإخراج في حالات الإمساك المزمن عند كبار السن
مكونات اللبن :
1- كربوهيدرات : لاكتوز .
2- بروتينات : كازين و الفا لاكتالبيومين ولاكتوفيريين وبيتا لاكتو جلوبيولين.
3- الليبيدات: دهون ثلاثية والفوسفولبيدات.
4- مواد معدنية : Na, Ca, K, Mg, Cl
النسب التقديرية للاكتوز في اللبن :
1-(6.8-7.3)% في الأنسان .
2-(4-4.6)% في اللبن البقري.
3-( 4.2)% في لبن الماعز.
اللاكتوز:
-السكر الأساسي في اللبن .
- سكر ثنائي مختزل .
- يتكون من جالاكتوز وجلوكوز .
اللاكتوز في اللبن (بواسطة انزيمات الستربتوكوكسلاكتيس) حامض اللاكتيك
(تخثر اللبن ) في الزبادي
لتعيين تركيز اللاكتوز في اللبن لابد اولا من ترسيب الكازين بواسطة اضافة
Na-tungestate , H2so4
وذلك لتفادي التداخل مع الكازين وتفادي الأخطاء في القياس.
الأدوات المستخدمة :
- أنابيب زجاجية
- دورق مخروطي
- سحاحة 10 مل .
- ماصات زجاجية.
- قمع زجاجي
-ورق ترشيح
- دورق عياري.
المواد المستخدمه:
1-اللبن
2-حمض الكبريتيك (2/3N).
3- حمض الخليك (10%).
4- هيدروكسيد الصوديوم(1.5).
5- حمض الكبريتيك (5%).
6- Na2S2O3 (0.1N).
7- محلول اليود (0.1N).
طريقة العمل:
1- ترسيب الكازين(بروتين اللبن ) :
- اضف الى دورق قياسي 5 مل من اللبن باستخدام ماصة زجاجية .
- اضف 3مل حمض الكبريتيك (2/3N).
- اضف 3مل حمض الخليك (10%).
- رج جيدا ثم أكمل الحجم الى 100 مل باضافة الماء.
- رشح المحلول عدة مرات حتى تحصل على محلول نقي.
- المحلول الناتج من عملية الترشيح لايحتوي على بروتين الكازين وبالتالي يسمى محلول خال من البروتين.
- وبالتالي فالمحلول الناتج يحتوي على اللاكتوز المراد تعيينه.
2- تعيين تركيز اللاكتوز في المحلول المرشح بواسطة المعايرة الأيودومترية:
1-أضف الى انبوبة اختبار 1 مل من المحلول الراشح و2مل من هيدروكسيد الصوديوم(1.5%).(Test)
2-أضيف 2 مل من اليود )0.1N).
3- اترك الأنبوبة في ركن مظلم لفترة زمنية 15 دقيقة.
4- أضف 3 مل من حمض الكبريتيك (5%)
5-قم بمعايرة المحلول مع Na2S2O3 (0.1N). حتى يكون عديم اللون.
6-أضف الى انبوبة اختبار اخرى 1 مل من الماء بدلا من المحلول الراشح ثم قم باعادة باقي الخطوات مرة اخرى.(بلانك).
النتائج:
1 مل من اليود (0.1N( ≡ 0.018جم من اللاكتوز
Vi ≡x جم من اللاكتوز
X ≡ 1 ml PFF
Y ≡100 ml PFF
Conc of lactose in milk = y * D.F
D.F= dilution factor = final volume/ initial volume.
تقدير تركيز الكالسيوم في اللبن
اهمية الكالسيوم
الكالسيوم من العناصر الاساسية في الجسم وان نقصه يؤدي الى الكساح لدى الاطفال وهشاشة العظام لدى البالغين وخاصة النساء ويؤثر نقصه على القلب والاعصاب والعضلات والاسنان
نحصل على الكالسيوم من الحليب واللبن الزبادي والجبنة وبياض البيض والخضروات .
ويفيد هذا الكالسيوم في الوقاية من العديد من الأمراض مثل:
الوقاية من هشاشة العظام: إذ أوضحت الدراسات أن تناول منتجات الألبان خلال مرحلة الطفولة والبلوغ لها دور واضح في سلامة العظام في مراحل العمر المتقدمة وفي تقرير للمعهد القومي للصحة بالولايات المتحدة اتضح أن الإنسان لا يمكنه الحصول على احتياجاته اليومية في الكالسيوم إلا بتناول اللبن ومنتجاته حيث يوصي بتناول 2 – 3 كوب لبن يومياً أو ما يعادلها من منتجات الألبان وذلك للحصول على الاحتياجات اليومية من هذا العنصر العام.
2- وجود الكالسيوم والماغنسيوم والبوتاسيوم في اللبن بنسب متوازنة يلعب دور هام في خفض ضغط الدم لدى الأفراد ذوي ضغط الدم متوسط الارتفاع
3- يفيد الكالسيوم في خفض وزن الجسم وتقليل البدانة فزيادة الكالسيوم في الغذاء ينتج عنها زيادة في تحلل الدهون والخروج من البراز بدلاً من تراكمها في الجسم فنجد أن زيادة الكالسيوم بمقدار 300 ملجم ينتج عنها فقد في الوزن بمقدار واحد كجم عند الأطفال ويكون الفقد في الوزن بمقدار 2,5 كجم عند الكبار.
الأدوات المستخدمة :
- أنابيب زجاجية
- دورق مخروطي
- سحاحة 10 مل .
- ماصات زجاجية.
- قمع زجاجي
-ورق ترشيح
- دورق عياري.
- حمام مائي.
المواد المستخدمة:
1-اللبن
2-حمض الكبريتيك (N3/2).
Na –tungestate3-(10%).
4-اوكسالات الأمونيوم (1.5).
5-حمض الكبريتيك (1N).
6-برمنجنات البوتاسيوم(0.01N).
طريقة العمل:
1-ترسيب البروتين :
- اضف الى دورق قياسي 5 مل من اللبن باستخدام ماصة زجاجية .
- اضف 3مل حمض الكبريتيك(N3/2).
- اضف 3 مل Na –tungestate-(10%).
- (عامل الترسيب : حمض الكبريتيك + Na –tungestate-).
- قم بالرج جيدا لمدة 5 دقائق واكمل الحجم الى 100 مل ماء ثم ترشيح المحلول.
- المحلول الناتج من عملية الترشيح لايحتوي على بروتين وبالتالي يسمى محلول خال من البروتين ويحتوي على الكالسيوم .
- قم بالقاء الراسب واحتفظ بالراشح(PFF ).ثم قيس الحجم الكلي للراشح وهو( TV ).
- خذ 2 مل من الراشح في انبوب اختبار.
- اضف اليه 3 مل من اوكسالات الأمونيوم(4%).
- رج لمدة 10 دقائق ثم اتركه لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة .
- رشح مرة اخرى واحتفظ بالراسب(اوكسالات الكالسيوم).
- اغسل الر اسب بمحلول مخفف من الأمونيا للتخلص من الشوائب وارمي الراشح.
- اضف 2 مل من حمض الكبريتيك (1N).
- سخن المحلول عند60-70م على اللهب مباشرة .(تنشيط تفاعل الأكسدة والأختزال).
- قم بمعايرة المحلول بمحلول برمنجنات البوتاسيوم(0.01N).
- اعيد نفس الخطوات على بلانك باستخدام 2 مل من الماء بدلا من الراشح
النتائج:
1 ml 0.01N KMNO4 is equivalent to 0.2 mg Ca
Vi(Vt-Vb) is equivalent to x mgCa
X mg Ca =Vi * 0.2
X mg present in 2ml PFF
Ymg present in TV ml PFF (Total Volume)
Y mg = x mg *TV/2
Y mg present in 5 ml milk
Z mg present in 100 ml milk
Conc of Ca /100 ml milk (Zmg)= Ymg*100/5
التقدير الكمي لفيتامين ج
تعيين حمض الأسكوربيك باستخدام اليود و برمنجنات البوتاسيوم
حمض الأسكوربيك او فيتامين سي :
- يوجد بكثرة في الموالح والفواكه والطماطم
- يعتبر من الفيتامينات القابلة للذوبان في الماء .
- من أهم وظائفه : - المساعدة في تكوين العظام حيث أن نقصه يؤدي الى هشاشة العظام.
- يسهل عملية امتصاص الحديد في المعدة
- يحافظ على فيتامين أ و ب من الأكسدة.
- مانع من موانع الأكسدة : يستخدم في علاج الألتهابات والحساسية وكذلك مانع لتكوين الجلطة ومقاوم لمرض السرطان.
- 1- تعيين تركيز حمض الأسكوربيك باستخدام اليود:
- نظرية التجربة :حمض الأسكوربيك يتأكسد باليود الى حمض ديهيدرواسكوربيك بينما يختزل اليود الى معقد من اليود والنشا له لون أزرق الى بنفسجي
I2 + ascorbic acid →dehydro ascorbic acid(oxidized)+2I.
I+ I2 +starch→ I3 – starch complex (purple-blue ).
المواد المستخدمة:
محلول قياس من حمض الأسكوربيك(100mg% )
محلول النشا (1%) - محلول اليود
-حمض الهيدروكلوريك (1M).
طريقة العمل :
1- 2 مل من المحلول القياسي لحمض الأسكوربيك في دورق قياسي .
2- اضف 5 مل من الماء .
3- اضف 1 مل من حمض الهيدروكلوريك
4- ثم 0.5 مل من محلول النشا
5- قم بمعايرة المخلوط مع محلول اليود حتى يظهر اللون الأزرق.
6- أعيد نفس الخطوات مع 2 مل من محلول مجهول التركيز من حمض الأسكوربيك.
7- الحسابات :
Conc of unknown = test /standard*conc of standard *D.F= mg%
Dilution factor =final volume/initial volume =(8.5/2).
2- تعيين حمض الأسكوربيك باستخدام برمنجنات البوتاسيوم:
نظرية التجربة: حمض الأسكوربيك يتأكسد ببرمنجنات البوتاسيوم الى حمض ديهيدرو اسكوربيك وفي نفس الوقت فان البرمنجنات تختزل الى مركب عديم اللون ولهذا فان نقطة النهاية للتفاعل يمكن ان تتم بسهولة.
التفاعل تفاعل اكسدة واختزال يحتاج الى تسخين لتنشيط التفاعل.
2* Mno4 +5 e+ 8 H →Mn + 4 H2O
5* L-ascorbic acid → dehydroascorbic acid+ 2e+ 2H
…………………………………………………………………
2 Mno4 +6H+5L-ascorbic acid→2Mn+8 H2O
+5 dehydroascorbic acid
المواد المستخدمة:
محلول قياس من حمض الأسكوربيك(100mg% )
محلول برمنجنات البوتاسيوم (0.01M).
حمض الكبريتيك (14N)..
طريقة العمل :
1- 2 مل من المحلول المجهول التركيز لحمض الأسكوربيك في دورق قياسي .
2- اضف2 مل من حمض الكبريتيك (14N).
3- معايرة المخلوط مع محلول برمنجنات البوتاسيوم حتى يظهر لون وردي فاتح.
4- نقطة النهاية هنا تسمى (Vt or test).
5- اعيد نفس الخطوات على 2 مل من الماء بدلا من محلول حمض الأسكوربيك
6- نقطة النهاية هنا تسمى (Vb or blank).
7- الحسابات :
Conc of unknown = T-B/S-B=*conc of standard
Or
Vi=Vt-Vb
1 ml MNO 4 (0.01N) = 0.0044gm ascorbic
Vi = x gm vit C
X gm ………………….2ml
y……………………….100ml
conc of unknown (y) = gm% (gm/100ml).
مكــــــونات البـــــول
1- الخواص الفيزيائية للبول:
1- لون البول :البول اصفر اللون اوكهرماني ويتغير اللون بتغير كمية البول المفرزة ولذلك نجد ان اللون يزداد تركيزه في الصيف لقلة حجم البول ويصير اصفر شاحب في الشتاء لزيادة حجم البول.
2- تفاعل البول:يمكن للبول ان يكون ذا تفاعل حمضي او قلوي اومعتدل حسب انواع المواد الغذائية الداخلة الى الجسم.
3- حجم البول اليومي: تختلف كمية البول التي يطرحها الإنسان في اليوم الواحد حسب ما يحيط به من ظروف وما يسود داخل جسمه احيانا من احوال فهي في المتوسط حوالي 1-2 لتريوميا للرجال وحوالي 1.2لترا للنساء ويزداد حجم البول عند الإكثار من السوائل خاصة القهوة والشاي وفي الحالات المرضية مثل البول السكري.
4- كثافة البول : هناك علاقة بين كثافة البول وحجمه ففي الحالات الطبيعية تبلغ هذه الكثافة( الكثافة النوعية ) حوالي 1010-1024 /24 ساعة لبول يوم كامل وهذا بالطبع مرتبط بكمية السوائل المتناولة خلال اليوم كذلك تزيد الكثافة بنسبة ملحوظة في حالة المصابين بالسكري .
5- رائحة البول : للبول الطبيعي عند الأنسان رائحة خاصة عند وجود المركبات الفينولية فيه الا انه من الممكن ان تصبح رائحته غير طبيعية في بعض حالات امراض الجهاز البولي وكذلك اذا ترك البول فترة من الزمن معرضا للهواء حيث تتحلل اليوريا الى امونيا حيث تظهر رائحتها الخاصة.
المكونات الطبيعية للبول ( التركيب الكيميائي):
بالإضافة الى الماء يحتوي البول على مجموعتين من المكونات مركبات عضوية ومركبات لا عضوية .
1-المركبات العضوية:
- اليوريا : من اهم النواتج النهائية لعمليات ايض المركبات البروتينية وتعتمد كمية هذا المركب المطروحة في اليوم الواحد على كمية البروتينات في الغذاء ففي الحالات الطبيعية وفي ظروف التغذية الإعتيادية عند الإنسان تبلغ كمية اليوريا المطروحة في اليوم الواحد من 25-35 جم /يوميا بمتوسط 30 جم والجزء الأكبر من كمية اليوريا مصدره الكبد.
- الأحماض الأمينية: تدخل الأحماض الأمينية في تكوين البول في الحالة الطبيعية ولكن بكميات قليلة. وفي الحالات المرضية تزداد كمية الأحماض الأمينية المطروحة .
- حامض البول (اليوريك): هذا الحامض من النواتج المهمة لأكسدة البيورينات في الجسم كما يتكون من تحطيم الاحماض النووية في الخلية وعليه فان زيادة الأغذية الغنية بمركبات البيورين يؤدي الى ارتفاع نسبة حامض اليوريك المطروحة من الجسم ويزداد في الحالات المرضية مثل اللوكيميا والنقرس ومرضى الكبد.
-الكرياتينين: هو احد المركبات النيتروجينية الهامة الداخلة في تكوين البول حيث تبلغ كميته المطروحة خلال يوم واحد عند الإنسان حوالي 0.5-1.5 جم/24 ساعة .
2--المركبات الغير العضوية:
- الصوديوم : اهم الأملاح الغيرعضوية في بول الإنسان هو كلوريد الصوديوم ووجوده وتركيزه مرتبط بنوع المواد الغذائية .
- البوتاسيوم والماغنسيوم والكالسيوم:مصدرها الأغذية النباتية وخاصة البوتاسيوم.
- الأمونيا (النشادر): تطرح الأمونيا مع البول على شكل املاح الأمونيوم ويشكل النيتروجين الذي تحمله هذه الأملاح حوالي 3-6% من مجموع كمية النيتروجين العامة المطروحة مع البول وتزداد في حالة مرضى السكري.
- الفوسفات: هناك جزء من املاح حامض الفوسفور مصدره المواد الغذائية وجزء اخر ياتي من عمليات تفكك المركبات العضوية المحتوية على الفوسفور .
2- المكونات المرضية (الشاذة ) في البول:
ان ما استعرضناه في الفقرات السابقة هو التكوين الكيميائي لبول الإنسان في الحالة الطبيعية الإ انه تظهر في عدد من الحالات المرضية بعض المركبات التي لا وجود لها في الحالة الطبيعية وفيما يلي بعض المركبات التي تظهر في الحالات المرضية :
1- البروتينات : توجد البروتينات في بول الإنسان في الحالة الطبيعية بكميات ضئيلة جدا الإ انه في حالة التهاب الكليتين يظهر الألبومين في البول . وهناك نوع من البروتينات يعرف باسم بنس جونس والذي يظهر بشكل خاص في حالة وجود الأمراض الخبيثة (الأورام)وله خواص متميزة اذ انه يترسب عند تسخين البول الى 50-60م ثم يعود الى الذوبان اذا ارتفعت حرارته الى 80م فاذا برد البول الساخن مرة اخرى فان بروتين بنس جونس يترسب عند درجة 50-60م .
2- الجلوكوز : من اهم المركبات التي توجد في البول لمرضى السكري ويعرف ظهوره جلوكوسوريا ويمكن الكشف عنه باستخدام كاشف فهلنج او بندكت.
3- اللاكتوز: ظهور سكر اللاكتوز في البول يسمى التبول اللاكتوزي ويلاحظ عند النساء وذلك في الأيام الأخيرة التي تسبق الولادة وكذلك عند ارضاعهن لأطفالهن.
4- الأجسام الكيتونية: ان الأجسام الكيتونية التي تظهر مع البول هي الأسيتون وحامض هيدروكسي بيوتيريك وتدعى هذة الظاهرة بكيتونيوريا ويظهر الأسيتون في حالة مرضى السكري.
التجارب العملية الخاصة بالمكونات الطبيعية في البول :
1- الكشف عن الكرياتينين:
1- تفاعل جافي (حمض البيكريك):
- اضف الى انبوبه اختبار 5 مل من البول الطازج .
- اضف 2مل حمض البيكريك (10%(.
- اضف 2مل هيدروكسيد الصوديوم(10%).
- نلاحظ تكون اللون الأحمر نتيجة لتكون بيكرات الكرياتينين.
- اضف الى نفس الأنبوب 2-3 نقاط من حمض الهيروكلوريك المركز نلاحظ ظهور اللون الأصفر دلالة على تكون الكرياتينين.
- ملاحظة : تم اضافة حمض الهيروكلوريك المركز لتكسير بيكرات الكرياتينين وتكوين الكرياتين.
2- تفاعل النيتروبروسايد:
- اضف 5 مل بول الى انبوب اختبار .
- اضف عدة نقاط من صوديوم نيتروبروسايد.
- اضف 1 مل من هيدروكسيد الصوديوم (10%).
- نلاحظ ظهور اللون الأحمر ثم بعد 3 دقائق يختفي ويظهر اللون الأصفر دلالة على وجود الكرياتينين
2-الكشف عن الفوسفات :
- اضف الى انبوب اختبار 5 مل من البول وسخن على اللهب مباشرة يتكون تعكير للبول او ظهور راسب ( يعني وجود الفوسفات او البروتين ).
- اضف حمض الخليك (الذي يذيب املاح الفوسفات فقط ).
- اذا ظهر بول خال من الشوائب وذه التعكير بالتالي الفوسفات هو سبب التعكير وذاب باضافة حمض الخليك.
- اذا لم يختفي التعكير اذن فالبروتين هو سبب التعكير وهو لا يذوب بحمض الخليك وبالتالي فهي حالة مرضية.
- 3- الكشف عن الكالسيوم : ( تفاعل سالكوفيتش)
- اضف الى انبوب اختبار 5 مل من البول
- اضف 2 مل من محلول سالكوفيتش ( حمض الأوكساليك واوكسالات الأمونيوم وحمض الخليك ).
- نلاحظ تكون راسب ابيض من اوكسلات الكالسيوم.
- 4-الكشف عن الكلور:
- اضف الى انبوب اختبار 5 مل من البول
- اضف نقاط من نيترات الفضة
- اضف 1 مل من حمض النيتريك
- نلاحظ تكون راسب ابيض من كلوريد الفضة .
- 5- الكشف عن الكبريت :
- اضف الى انبوب اختبار 5 مل من البول
- اضف 3 مل حمض الخليك
- اضف 3 مل كلوريد الباريوم
- نلاحظ تكون راسب من كبريتات الباريوم
- قم بترشيح المحلول وخذ الراشح وضع عليه 2 مل من حمض الهيدروكلوريك المركز و2مل من كلوريد الباريوم
- نلاحظ تكون راسب ابيض من كبريتات الباريوم .
2-المكونات الشاذة في البول :
1- الكشف عن السكر ( مرضى البول السكري):
تفاعل فهلنج :
- اضف الى انبوب اختبار 1 مل من البول
- اضف امل فهلنج أ ثم امل فهلنج ب
- حمام مائي لمدة 5 دقائق
- ظهور راسب احمر
- اذن يوجد سكر في البول
- تفاعل بندكت :
- اضف الى انبوب اختبار 1 مل من البول
- اضف 1 مل من محلول بندكت
- حمام مائي لمدة 5 دقائق
- ظهور اللون الأحمر.
- اذن يوجد سكر في البول
التعرف على مكونات الدم
مكونات الدم:
1- 45% من الدم عبارة عن خلايا
الصفائح الدموية- كرات الدم البيضاء –كرات الدم الحمراء).
2- 55% من الدم عبارة عن بلازما : (90% من الماء – غازات(O2-CO2-N2) -10% مواد صلبة.
- مواد صلبة : 1% املاح ومواد غير عضوية- 9% مواد عضوية (بروتين البلازما ومركبات اخرى ).
الخواص الفيزيائية للدم:
الحجم: 7-8% من وزن الجسم.
5 لتر في الانسان البالغ.
اللون : الدم الوريدي احمر .
الكثافة النوعية:
الدم الكامل : 1.059-1.06
البلازما : 1.024-1.028
خلايا الدم: 1.09
الضغط الأسموزي:
5000 ملم زئبق
وظائف الدم :
1- التنفس
2- التغذية
3- الأخراج
4- الهضم
5- الأيض
6- الدفاع ضد الميكروبات
7- تنظيم حرارة الجسم
8- محلول منظم
9- اتزان الماء
1- تعيين نشاط الألنين امينوترانسفيراز في السيرم ( ALT):
- هذا الأنزيم ينقل مجموعة الأمين من الحمض الأميني (الألنين) الى الفا كيتو جلوتارات.
- يوجد بتركيزات عالية في الكبد ونسب منخفضة في العضلات الهيكلية و عضلات القلب.
نظرية التجربة : الأنزيم ينشط هذا التفاعل:
Alanine + alpha-ketoglutarate pyruvate+glutamate
المواد المستخدمة:
1- محلول منظم من (ALT):
Phosphate buffer PH7.5, 100mmol/l; Alanine206mmol/l and ketoglutarate 2 mmol/l.
2- محلول ملون: 2.4-dinitrophenyl hydrazine2 mmol/l
3- محلول هيدروكسيد الصوديوم (0.4N).
الطريقة :
1- حضر انبوبة اختبار للعينة واخرى للبلانك.
2- اضف0.5 مل من محلول منظم (ALT) لكلا الأنبوبتين.
3- ضعهما لمدة 5 دقائق في حمام مائي عند 37 م.
4- اضف 100ميكرو ليتر من السيرم الى انبوبة العينة و 100 ميكرو ليتر من الماء الى انبوبة البلانك.
5- رج كلا الأنبوبتين وضعهما لمدة 30 دقيقة في حمام مائي عند 37م.
6- اضف 0.5 مل من المحلول الملون لكل ا لأنابيب ورج جيدا.
7- ضعهما في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة .
8- اضف 5 مل من هيدروكسيد الصوديوم لكل الأنابيب ورج جيدا.
9- اتركهما 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة .
10- اقرأ الأمتصاص للعينة عند 505 نانو ميتر بعد ضبط الجهاز على البلانك.
11- احسب نشاط الأنزيم من الجدول التالي:
النشاط(U/ml) الأمتصاص النشاط(U/ml) الأمتصاص
50 0.16 5 0.02
57 0.18 9 0.04
65 0.2 15 0.06
73 0.22 23 0.08
78 0.24 29 0.1
86 0.26 36 0.12
92 0.28 44 0.14
المعدل الطبيعي: حتى U/ml40
يزيد المعدل الطبيعي في حالات موت الخلايا الكبدية او اتلافها كما في :
- الفيروسات الكبدية.
- التسمم الدوائي
- الصدمة
2- تعيين نشاط اسبارتات امينوترانسفيراز في السيرم ( AST):
- هذا الأنزيم ينقل مجموعة الأمين من الأسبارتات الى الفا كيتو جلوتارات.
- يوجد بتركيزات عالية في الكبد وفي العضلات الهيكلية و عضلات القلب والكلية
نظرية التجربة : الأنزيم ينشط هذا التفاعل:
Aspartate + alpha-ketoglutarate oxaloacetate+glutamate
المواد المستخدمة:
1-محلول منظم من (AST):
Phosphate buffer PH7.5, 100mmol/l; Aspartate 200mmol/l and ketoglutarate 2 mmol/l.
2- محلول ملون: 2.4-dinitrophenyl hydrazine2 mmol/l
3-محلول هيدروكسيد الصوديوم (0.4N).
الطريقة :
1-حضر انبوبة اختبار للعينة واخرى للبلانك.
2 اضف0.5 مل من محلول منظم (AST) لكلا الأنبوبتين.
3 ضعهما لمدة 5 دقائق في حمام مائي عند 37 م.
4 اضف 100ميكرو ليتر من السيرم الى انبوبة العينة و 100 ميكرو ليتر من الماء الى انبوبة البلانك.
5 رج كلا الأنبوبتين وضعهما لمدة 30 دقيقة في حمام مائي عند 37م.
6 اضف 0.5 مل من المحلول الملون لكل ا لأنابيب ورج جيدا.
7 ضعهما في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة .
8 اضف 5 مل من هيدروكسيد الصوديوم لكل الأنابيب ورج جيدا.
9 اتركهما 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة .
10 اقرأ الأمتصاص للعينة عند 505 نانو ميتر بعد ضبط الجهاز على البلانك.
11 احسب نشاط الأنزيم من الجدول التالي:
النشاط(U/ml) الأمتصاص النشاط(U/ml) الأمتصاص
99 0.16 10 0.02
113 0.18 15 0.04
128 0.2 27 0.06
141 0.22 40 0.08
155 0.24 55 0.1
170 0.26 69 0.12
185 0.28 84 0.14
المعدل الطبيعي: حتى U/ml40
يزيد المعدل الطبيعي في حالات :
- تليف الكبد
- السرطان
- النزيف
- امراض القلب
الأربعاء أكتوبر 14, 2020 9:41 am من طرف حسام الفيتوري
» خطوات انتاج العصير
الجمعة سبتمبر 27, 2019 8:42 pm من طرف Mtehar
» صناعة حلوي الشيكولاتة
السبت مايو 26, 2018 6:41 am من طرف حمدي
» المارجرين MARGARINE
الخميس مايو 11, 2017 9:42 pm من طرف chetouane
» المايونيز
الخميس مايو 11, 2017 4:37 pm من طرف chetouane
» فحوصات العصائر والمشروبات الغازية المايكروبية
الخميس مايو 11, 2017 4:34 pm من طرف chetouane
» الغذاء والتغذيه 2
الثلاثاء مايو 02, 2017 5:23 pm من طرف farageloo
» الغذاء والتغذيه
الثلاثاء مايو 02, 2017 5:23 pm من طرف farageloo
» اللحوم العضويه
الثلاثاء مايو 02, 2017 5:20 pm من طرف farageloo